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1 《中国药理学与毒理学杂志》为军事医学科学院毒物药物研究所、中国药 理学会和中国毒理学会共同主办的学术性刊物，双月刊，国内外公开发行。编辑部设在军事医学科学院毒物药物研究所。本刊是中国中文核心期刊
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小鼠干扰素γ受体β基因启动子荧光报告载体构建及转录活性分析
作者:王棋 王心正 韩秋影 樊浩 李亭亭 巩伟丽 周涛 李卫华
关键词: 干扰素γ; 受体; 启动子; 转录因子; 转录调控;
摘要：目的克隆小鼠干扰素γ受体β(Ifngr2)基因启动子,并应用双荧光素酶报告系统对其进行功能分析。方法首先应用欧洲启动子在线数据库(EPD)获得小鼠Ifngr2基因的启动子区域,包含转录起始位点在内的-1344～+48的DNA序列。然后以小鼠MEF细胞基因组DNA为模板,利用PCR扩增调取该序列,并进一步插入pGL4.19-luc2CP荧光素酶报告载体。通过PCR扩增获得启动子系列截短体并分别插入pGL4.19-luc2CP载体,共获得包含6个不同长度启动子序列的荧光素酶报告载体。进一步通过双荧光报告实验检测不同截短体对Ifngr2基因转录活性影响,确定其影响转录活性的关键区域。通过点突变探究潜在转录因子对Ifngr2基因转录的影响。结果成功构建小鼠Ifngr2基因启动子荧光素酶报告载体,获得有转录活性的启动子报告基因载体。启动子系列截短分析显示,-132～-97和-1059～-727包含启动子重要元件。生物信息学分析发现,在-132～-97区域内存在潜在的NF-κB结合位点,进而通过点突变实验得到验证。结论通过构建小鼠Ifngr2基因启动子报告载体并对Ifngr2启动子进行功能分析,发现小鼠Ifngr2基因启动子中的转录因子NF-κB结合区域,提示NF-κB在Ifngr2基因表达调控中起重要作用。
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